GMP成品内控标准

内控标准 Q/SL-07.01-01.2004

5'-鸟苷酸二钠（GMP）成品

本标准根据国家轻工业局QB/T 3799《 食品添加剂 5′—鸟苷酸二钠》标准，并结合本厂生产实际制定。

化学名称：5'-鸟苷酸二钠

结构式： OH

NN

2O Na 3POH 2C N N NH 2

O H H C C

分子式：C10H12N5Na2O8P.xH2O

分子量（无水）：407.19 1．技术要求

1．1 外观和感官要求：

本品为白色结晶或结晶性粉未；具有特殊鲜味，易溶于水，微溶于乙醇，难溶于乙醚。

2．理化指标 项目 溶状 透光率，% 含量，% 干燥失重，% 紫外吸光（250/260） 度比值 （280/260） 其他氨基酸 铵盐（NH4） PH 砷(As)，% 重金属（以Pb计），% 其他核苷酸 HPLC（色谱主峰面积和）， % 黑粒， （粒/g） 纤维毛（<1.0cm/条）， （条/g） HHOOHHCC指标 清澈透明 ≥96.0% ≥98.0 16.0~23.0 0.94～1.04 0.63～0.71 合格 合格 7.0～8.5 ≤0.0002 ≤0.002 合格 ≥95.5 ≤4(不得出现明显色深黑粒) ≤4(不得出现≥1.0cm/条或有色纤维毛) 批准人：吴敏芝 实施日期：2004年3月30日

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3．检验方法： 3．1 鉴别试验

3．1．1 仪器：紫外分光光度计，备有10mm石英比色皿。 3．1．2 试剂和溶液：盐酸（A.R.）0.01mol/L溶液。 3．1．3 试验程序

称取试样0.01g（称准至0.0001g），溶于0.01mol/L盐酸溶液500ml中，用紫外分光光度计10比色皿，在220～320nm波长下，测定其吸光度。

3．1．4 结果的处理

若最大吸收值在256±2nm波长处为合格，否则判为不合格。 3．2 溶状

称取试样0.1g，溶于10ml水中，在亮光下观察，其溶液应为清澈透明，无肉眼可见杂质。

3．3 透光率

3．3．1原理：单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度成正比，即A=lg1/T =ECL。

3．3．2试验程序

称取试样0.5g ，溶于10ml水中，其溶液应为清澈透明，无肉眼可见杂质。将溶液置于1cm比色皿中，用分光光度计，于430nm 波长处测定溶液的透光率。

3．3．3允许差：同一样品两次测定值之差不得超过0.5%，结果保留一位小数。 3．4 含量

3．4．1 仪器：紫外分光光度计，备有10mm比色皿。 3．4．2 试剂和溶液：盐酸（A.R.）0.01mol/L 3．4．3 试验程序

a． 准确称取试样0.5g（称准至0.0001g），用0.01mol/L盐酸溶液溶解，并稀释至 500ml，此溶液浓度为0.5mg/ml。吸取5ml上述溶液，用0.01mol/L盐酸溶液稀释至250ml，此溶液即为试样液。

b．将上述试样液注入10mm石英比色皿，以0.01mol/L盐酸溶液作空白，于紫外 分光光度计260nm波长下，测定其吸光度（A）。 批准人：吴敏芝 实施日期：2004年3月30日

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3．4．4 计算

XA250100100 289.8m100B式中：X——5’鸟苷酸二钠的含量，%；

A——在260nm波长下，测得样液的吸光度；

m——试样质量，g； B——干燥失重，%；

289.9——5’—鸟苷酸二钠的吸光度。

3．4．5 结果的允许差

同一样品两次测定值之差不得超过0.5%。 3．5 干燥失重 3．5．1 仪器

3．5．1．1 电热干燥箱：120±2℃ 3．5．1．2 干燥器：以硅胶作干燥剂。 3．5．1．3 称量瓶：直径为5cm 3．5．2 试验程序：

用烘干之恒重的称量瓶称取试样1g（称准至0.01g），放入120℃干燥箱内烘干4h，取出加盖，放入干燥器中，冷却至室温，称量。

3．5．3 计算：

X1m2m3100

m2m1式中：X1——干燥失重，%；

m1——称量瓶质量，g；

m2——烘干前称量瓶加样品的质量，g； m3——烘干后称量瓶加样品的质量，g； 3．5．4 结果的允许差

同一样品两次测定值之差不得超过0.5%。 3．6 紫外吸光度比值

3．6．1 仪器：紫外分光光度计。

批准人：吴敏芝 实施日期：2004年3月30日

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3．6．2 试剂和溶液：盐酸（A.R.）0.01mol/L溶液。 3．6．3 试验程序

将试样液（3．3．3a）注入10mm比色皿，以0.01mol/L盐酸作空白，分别测定在波长250nm、260nm、280nm下的吸光度。

3．6．4 计算

X2X3A1 A2A3 A2式中：X2——紫外吸光度比值（250/260）； X3——紫外吸光度比值（280/260）； A1——在波长250nm下的吸光度； A2——在波长260nm下的吸光度； A3——在波长280nm下的吸光度； 3．7 其他氨基酸 3．7．1 试剂和溶液 0.5%茚三酮溶液

取茚三酮0.5克，加乙醇使溶解成100ml，即得。 3．7．2 试剂程序

称取样品0.1克，加水溶解定容至100ml，取5ml，加入0.5%茚三酮乙醇溶液1ml，于沸水浴中加热3min。

3．7．3 结果的处理

若石蕊试纸不显色为合格，否则判为不合格。 3．8 铵盐

3．8．1 试剂与试纸 3．8．1．1 氧化镁（A.R.） 3．8．1．2 红色石蕊试纸 3．8．2 试验程序

称取试样0.1g于小试管中，加50g氧化镁及1ml水，以水湿润红色石蕊试纸放在试管口中，在水浴加热5min。 批准人：吴敏芝 实施日期：2004年3月30日

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3．8．3 结果的处理

若石蕊试纸不显色为合格，否则判为不合格。 3．9 PH

3．9．1 仪器：酸度计 3．9．2试验程序

称取试样1g（称准至0.1g），加20ml水溶解，用酸度计测定其PH值。 3．10 砷

3．10．1原理：锌与酸作用所产生的初生态氢与供试品中微量砷盐化合物反应生成挥发性砷化氢，再与溴化汞或氧化汞试纸作用生成黄色或棕黄色砷斑，将样品与标准砷溶液在同一条件下所显的砷斑的颜色比较定量。

3．10．2仪器和材料 3．10．2．1砷瓶 3．10．2．2新华3#滤纸 3．10．3 试剂和溶液 3．10．3．1 盐酸（A.R.） 3．10．3．2 16.5%碘化钾

称取16.5g碘化钾（A.R.）用水定容至100ml。 3．10．3．3 40%酸性氯化亚锡

取氯化亚锡20g，加浓盐酸使之溶解成50ml。本液配成后3个月即不适用。 3．10．3．4 无砷金属锌（A.R.） 3．10．3．5 50ml/L醋酸铅溶液

取50g醋酸铅（A.R.）用水定容至1000ml。

3．10．3．6 5%醋酸铅棉花

取脱脂棉花，用醋酸铅溶液湿透后，除去过多的溶液，晾干，保存于密闭的瓶中。 3．10．3．7 5%溴化汞乙醇溶液

取溴化汞（A.R.）2.5g，加乙醇50ml，微热使溶解，即得。

3．10．3．8 溴化汞试纸

将剪成直径2cm的圆形滤纸片，在5%溴化汞乙醇溶液中，浸渍1h以上，保存于冰箱，临用前取出置暗外阴干备用。

3．10．3．9 20%氢氧化钠溶液

称取氢氧化钠（A.R.）20g用水定容至100ml。 批准人：吴敏芝 实施日期：2004年3月30日

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3．10．3．10 10%硫酸

吸取硫酸（A.R.）10ml，用水定容至100ml。

3．10．3．11 标准砷溶液的制备

精密称取105℃±2℃干燥至恒重的三氧化二砷(A.R.)0.132g，置1000ml量瓶中，加20%氢氧化钠溶液5ml溶解后，加10%硫酸25ml，用新生沸冷水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液，此溶液每毫升相当于0.1mg砷。

临用前,精密量取贮备液10ml,置于1000ml容量瓶中,加稀硫酸10ml,用水稀释至刻度,摇匀,即得(每1ml相当于1.0μg的As)。

3．10．4 试验程序

3．10．4．1 装置准备：将少量醋酸铅棉花约60mg装入导气管松紧适度，装管的高度为60～80mm，用1片溴化汞试纸封住顶管端孔口，加盖扎紧。

3．10．4．2 操作步骤：称取试样2g，置砷瓶中，加入20ml水溶解，加浓盐酸5ml，加16.5%碘化钾5ml，接着加入酸性氯化亚锡5滴，在室温放置十分钟后加约2g无砷金属锌，插上准备好的导气管；与准确吸取4.0ml标准砷溶液（1μg/ml）按同样方法处理后并置于室内25~40℃反应45分钟,将生成的砷斑与标准砷斑比较不得更深。（<0.0002%）

3．11重金属

3．11．1 原理:样品所含的金属杂质与硫化钠试液作用显色,与标准铅溶液比较定量。3．11．2仪器和材料 3．11．2．1纳氏比色管 3．11．3 试剂和溶液

3．11．3．1 0.01mg/ml标准铅溶液：

称取硝酸铅(A.R.)0.160g,置1000ml量瓶中,加硝酸(A.R.)5ml与水50ml溶解后,用水稀释至刻度,摇匀,作为贮备液。

临用前,精确量取贮备液10ml,置100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得 (每 1ml相当于10μg的铅)。

注：配制与贮存用玻璃容器均不得含铅。 3．11．3．2 醋酸盐缓冲液（PH3.5）：

称取醋酸铵（A.R.）25g，加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸溶液38ml，用 2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节PH值至3.5(电位法指示),用水稀释至100ml,摇匀。 批准人：吴敏芝 实施日期：2004年3月30日

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3．11．3．3 4%硫代乙酰胺试液

称取硫代乙酰胺(A.R.)4g，加水使溶解成100ml，置冰箱中保存。临用前取混合液（由1mol/L氢氧化钠溶液15ml、水5ml及甘油20ml组成）5.0ml,加上述硫代乙酰胺溶液1.0ml。置水浴上加热20秒钟，冷却，立即使用。

3．11．4 试验程序

称取样品2.0g，置于一支50ml纳氏比色管中，加25ml水溶解；另取一支50ml纳氏比色管，加入24ml水及2.0ml标准铅溶液（10μg/ml），然后分别向二支纳氏比色管加入醋酸盐缓冲溶液（PH3.5）2ml，及硫代乙酰胺试液2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，样液管显出的颜色与标准液管比，不得更深。

3．12 其他核苷酸 3．12．1 仪器和材料 3．12．1．1 玻璃层析缸

3．12．1．2 微量注射器（或吸血管） 3．12．1．3 吹风机

3．12．1．4 层析滤纸：20cm×40cm 3．12．2 试剂与溶液

展开剂：叔丁醇：饱和硫酸铵溶液：0.025mol/L氨水（3：160：40） 3．12．3 试验程序

a． 试样液的制备：称取试样0.1g，用水溶解并定容至10ml。

b．用微量注射器吸取试样液10µl，点于距层析滤纸底边5cm处，放在展开剂中，用上

升法展开30cm，取出凉干（或吹干），在暗室于紫外线（波长约250nm）下观察。

3．12．4 结果的处理

若呈现一个斑点为合格，否则为不合格。 3．13 色谱纯度

3．13．1 原理：用变压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂，缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，用记录仪记录色谱图，以达到定性定量的目的。

3．13．2 仪器和材料：

3．13．2．1 高效液相色谱系统 包括：单元泵（Iso.Pump）、自动进样器（ALS）、可变波长检测器（VWD）、恒温箱（Colcom） 批准人：吴敏芝 实施日期：2004年3月30日

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3．13．2．2 万分一天平

3．13．2．3 1000ml、500ml容量瓶 3．13．2．4 一次性使用无菌注射器

3．13．2．5 针筒式微孔滤膜过滤器（孔径0.45μm） 3．13．2．6 带拧盖式广口螺纹口玻璃瓶（2ml） 3．13．3 色谱条件

3．13．3．1 流速：1.2ml/min 3．13．3．2 流动相：5‰磷酸二氢钾 3．13．3．3 检测波长：254nm 3．13．3．4 进样量：2μl 3．13．3．5 运行时间：35min

3．13．3．6 试剂： 水：纯水 磷酸二氢钾：A.R.

3．13．3．7 流动相：准确称取磷酸二氢钾5g，用纯水溶解并定容至1000ml，经0.45μm水系滤膜过滤，超声脱气20min。

3．13．4 试验程序：准确称取样品1g，用纯水溶解并定容至1000ml，摇匀。用注射器吸取1000ml容量瓶中的试液后，套上针筒式微孔滤膜过滤器过滤，把过滤后的试液注入2ml纹口玻璃瓶中，旋上拧盖。把上述样品放置于高效液相色谱仪自动进样器样品盘中，然后按SOP《色谱纯度检测方法》进行样品检测,记录色谱图，结果保留一位小数。

3．14 黑粒

称取1.0g样品，溶于约30ml水中，放置2分钟，置于白色衬板上观察，记录黑粒的数量。

3．15 纤维毛

称取1.0g样品，溶于约30ml水中，放置2分钟，置于白色衬板上观察，记录纤维毛的数量

4．抽样方法：按SOP《I加G、IMP、GMP成品抽样》执行。

批准人：吴敏芝 实施日期：2004年3月30日

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广东肇庆星湖生物科技股份有限公司核苷酸厂

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广东肇庆星湖生物科技股份有限公司核苷酸厂

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（初稿）

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